TGFBetal免疫测试系统
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一些常见问题： |
| 1) 什么是TGFBetal免疫测试系统？ |
| 2) 同TGFBetal免疫测试系统配套的平板上是否有预包裹的单克隆抗体？ |
| 3) 同TGFBetal免疫测试系统配套的平板是否有特定的品牌要求？ |
| 4) 一次能处理的最小样品数是多少？ |
| 5) TGFBetal免疫测试系统的检测范围是多少？ |
| 6) TGFBetal免疫测试系统的特异性如何？和转化生长因子（TGF）Beta 2和TGF Beta 3有没有交叉反应？ |
| 7) TGFBetal免疫测试系统测试的是有生物活力还是总TGFBetal？ |
| 8) 提供的TGFBetal标准参照物是否需用酸活化？ |
| 9) 准备样品时应注意些什么？ |
| 10) 不同来源的血清中TGF Betal 的内源值是多少？ |
| 11) 导致过高的吸收读数的原因是什么？为此应采取什么步骤？ |
| 12) 对样品或TGF Betal 标准参照物应如何稀释？样品溶液的组分是什么？ |
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1) 什么是TGFBetal免疫测试系统？
TGFBetal免疫测试系统利用抗体杂交的原理测试生物活力的转化生长因子（TGF）Betal。溶液中的TGFBetal结合到96孔板中包裹的特异TGFBetal单克隆抗体，然后用抗TGFBetal多克隆抗体偶联的辣根过氧化酶检测。溶液中的TGFBetal的量和生色底物经氧化还原反应所产生的颜色成正比。 |
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2) 同TGFBetal免疫测试系统配套的平板上是否有预包裹的单克隆抗体？
试剂盒不带有平底的ELISA平板。平板必须单独购买，不提供预包裹单克隆抗体的平板。这为测试样品的数目提供了更大的灵活。 |
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3) 同TGFBetal免疫测试系统配套的平板是否有特定的品牌要求？
为使孔板间的数据准确，应用高质量的聚苯乙烯ELISA平板。和测试系统能配合使用的的平板有Costar(目录号#3590),Nunc(VWR目录号#439454), Dynatech Immulon-4(目录号#011-010-3855)。用这些平板测试的结果无明显差异。 |
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4) 一次能处理的最小样品数是多少？
和提供了预包裹平板的ELISA系统不同，TGFBetal免疫测试系统处理的样品数可根据需要改变。 |
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5) TGFBetal免疫测试系统的检测范围是多少？
TGFBetal免疫测试系统测组织培养上清液、血浆、血清、或尿液中生物活力的TGF，浓度范围是16-1000pg/ml。系统可确保测试的最小量为25pg/ml。 |
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6) TGFBetal免疫测试系统的特异性如何？和转化生长因子（TGF）Beta2和TGFBeta3有没有交叉反应？
TGFBetal免疫测试系统对TGFBetal有高度特异性,如结果所示。
表1.TGFBetal免疫测试系统的交叉反应:
异型TGFBeta1.2，TGFBeta 浓度1.15ng/ml，交叉反应 11.5%
异型TGFBeta2, TGFBeta浓度0.16ng/ml, 交叉反应1.6%
异型TGFBeta3, TGFBeta浓度0.07ng/ml, 交叉反应0.7%
所测10mg/ml异型TGF用1X样品液稀释后测试，TGFBeta1.2由TGFBeta1和TGFBeta2组成。 |
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7) TGFBetal免疫测试系统测试的是生物活力还是总TGFBetal？
TGFBetal免疫测试系统测试组织培养上清液、血浆、血清、或尿液中生物活力的TGFBetal。
用一个不同的操作步骤，在ELISA前，将样品酸活化后，可测提供的总TGFBetal的量。 |
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8) TGFBetal标准参照物是否需用酸活化？
TGFBetal标准参照物已被酸活化，进一步的酸活化会影响结果的准确。 |
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9) 准备样品时应注意什么？
应用EDTA而不是拧檬酸盐收集血浆，拧檬酸盐会干扰测试。测试前将样品保存在-20oC，避免多轮冻/融。测试前除去颗粒。由于血清和血浆中内源TGFBetal和结合蛋白的浓度高，Promega建议作如下的起始稀释：
A）样品中含10%FBS（比如条件化培养基）应按1:16(1X样品液)稀释
B）人血清和血浆样品作1：150(1X样品液。)稀释。
C）在平板内按梯度稀释TGFBetal标准参照物和实验样品时，注意不要用加样器吸头接触平板的底和壁。 |
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10) 不同来源的血清中TGFBetal的内源值是多少？
表2.不同来源的血清中TGFBetal的内源值
来源（ng/ml）
牛 （成年） 30
牛 （犊） 17
鸡 0.5
羊 12
马 7
人 20
猴 60
鼠 125
猪 21
大鼠 28 |
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11) 导致过高的吸收读数的原因是什么？为此应采取哪些步骤？
一个原因是样品添加溶液中的内源TGFBetal浓度过高（比如，培养液中或溶液中含血清）。不同来源的血清中TGFBetal的内源值如表2所示。为此应将添加溶液本身（比如，.不含样品）作为负对照。另一个原因是显色反应时间过长。显色反应时间应为3-4分钟。为此在4oC温度，使用显色反应的底物，或将偶联抗体用1X样品液按1:1200稀释。 |
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12) 对样品或TGFBetal标准参照物应如何稀释？样品溶液的组分是什么？
建议的稀释方法（1X样品液）：a）组织培养液中含10%FBS应按1:16稀释， b）人血清和血浆样品按1：150稀释， c）TGFBetal标准参照物按1：1000稀释。
专门设计的样品溶液含20ug/ml艮他霉素。 |
