EGGstractIgY纯化系统
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一些常见问题： |
| 1) 什么是EGGstractIgY纯化系统？ |
| 2) 什么是EGGstractIgY纯化系统的工作原理？ |
| 3) 如何保存EGGstractIgY纯化系统，它的保存期是多久？ |
| 4) 用EGGstractIgY纯化系统能作多少次纯化？ |
| 5) 从一个鸡蛋中能纯化多少IgY抗体，抗体的纯度如何？ |
| 6) 从鸡中产生抗体较兔中产生抗体有什么优点？ |
| 7) IgY抗体和从兔、山羊中产生的抗体有什么差别？ |
| 8) 用EGGstractIgY纯化系统能纯化其它哺乳动物抗体吗？ |
| 9) Promega是否有对IgY特异的二抗？ |
| 10) 如何定量IgY？ |
| 11) 推荐哪类鸡产生抗体？ |
| 12) 如何增加抗体的得率？ |
| 13) 如何对鸡作免疫？ |
| 14) 在美国还有哪些公司有免疫鸡的业务？ |
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1) 什么是EGGstractIgY纯化系统？
EGGstractIgY纯化系统是一种从鸡蛋黄中快速、简便地纯化蛋黄免疫球蛋白IgY的方法。用鸡蛋作为抗体来源，较传统的从哺乳动物中生产多克隆抗体的方法，方便，简单，便宜。 |
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2) 什么是EGGstractIgY纯化系统的工作原理？
从鸡蛋中纯化IgY，首先用纯化系统中的一种分离器将蛋白和蛋黄分开。用沉淀溶液A将蛋黄中大量的脂肪除去。用溶液B进一步纯化抗体。用这两种溶液沉淀得到75%纯度的IgY抗体。进一步（供选择），用溶液B沉淀可得到大约90%纯度的IgY抗体 |
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3) 如何保存EGGstractIgY纯化系统，它的保存期是多久？
EGGstractIgY纯化系统在室温条件下运输和保存，从购买之日起有效期为6个月。含IgY抗体的鸡蛋可在4oC保存一年后，再用EGGstractIgY纯化系统纯化。鸡蛋必需保存在干燥的环境中，过度潮湿会使鸡蛋透过蛋壳吸收细菌和真菌。 |
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4) 用EGGstractIgY纯化系统能作多少次纯化？
有两种EGGstractIgY纯化系统，可分别从免疫鸡的6个（目录号G2610）或者25个（目录号G1531）蛋中纯化总IgY抗体。 |
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5) 从一个鸡蛋中能纯化多少IgY抗体，抗体的纯度如何？
每ml鸡蛋黄中有3-5mgIgY抗体。每个蛋中大约有60-100mgIgY抗体。一般特异抗体占总多克隆抗体的2-10%。用基本方法纯化的IgY抗体的纯度为75%。进一步（供选择，15分钟），用溶液B作第二次沉淀，使抗体的纯度达90%，抗体的得率无明显下降。 |
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6) 从鸡中产生抗体较兔中产生抗体有什么优点？
A） 稳定的抗体来源
1个鸡蛋含有的抗体和1只兔中1次取血的抗体量相同。收蛋简单、温和。鸡一般1天下1个蛋，而兔却只能每2-3周抽1次血。
B） 降低免疫程控
鸡只需作1个月的免疫程控，就可获得高滴度抗体。让兔产生高滴度抗体，免疫时间需2-3个月。
C） 降低非特异结合
鸡的IgY不结合细菌和哺乳动物的Fc抗体。
D） 对哺乳动物的抗原有效
由于鸟和哺乳动物在遗传上相差远，鸡在产生抗保守哺乳动物蛋白的抗体时非常有效。高度保守的哺乳动物蛋白在兔中不能引起免疫应答，但在鸟类中却可成功地得到抗这些蛋白的抗体（1，2）。 |
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7) IgY抗体和从兔、山羊中产生的抗体有什么差别？
蛋黄IgY抗体是哺乳动物IgG抗体的180kDa同源物。用EGGstractIgY纯化系统纯化的抗体适合于免疫印迹（2），ELISA（7）和其它一般的免疫操作。 |
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8) 用EGGstractIgY纯化系统能纯化其它哺乳动物抗体吗？
EGGstractIgY纯化系统只能用于从鸡蛋黄中纯化抗体。不适于从哺乳动物血清中纯化抗体。 |
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9) Promega是否有对IgY特异的二抗？
Promega有多种抗鸡的IgY抗体。提供的二抗包括AP偶联物（目录号G1151），FITC偶联物（目录号G2691），生物素偶联物（目录号G2891），或者HRP偶联物（目录号G1351）。
还有一种抗鸡IgY的固定化的二抗体（目录号G1191）。IgY不和葡萄球菌蛋白A或者链球菌蛋白G结合。固定化的抗鸡IgY的抗体是一种亲和纯化的琼脂偶联物，用于免疫沉淀IgY结合蛋白。 |
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10) 如何定量IgY？
纯化所得IgY的量，可用对照IgY（目录号G1161），按Bradford蛋白测试法作标准曲线来测定。也可用分光光度法测定，1mg/mlIgY等于1.33A280,与IgG相似。 |
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11) 推荐哪类鸡产生抗体？
Promega推荐不带病菌的Leg-horn鸡，这类鸡的蛋大。 |
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12) 如何增加抗体的得率？
可一次用多个蛋纯化抗体，这样可减少样品在玻璃器皿上损失。 |
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13) 如何对鸡作免疫？
在0天用含0.1-0.5mg抗原的全Freund佐剂（CFA）对鸡免疫。在接下来的2次注射中，每次注射量为1ml。在14天，21天，28天，可用含0.05-0.55mg抗原的全Freund佐剂（CFA）对鸡再免疫。在30天，可开始收蛋。到35天时，滴度升高，并可保持大约1-6个月。每一个月可作一次注射，每次注射后可，高滴度可保持一个月。 |
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14) 在美国还有哪些公司有免疫鸡的业务？
Biocon, Inc Tel. 301-762-3202 或者 800-826-8426
Lampire Tel 215-795-2838
Panigen Tel 608-523-1903
Quality Biologicals. Inc. Tel 210-372-4797
Hazelton Research Products, Inc. Tel 717-336-4294, 或者800-345-4114. |
