常见问题

凋亡荧光素检测系统

一些常见问题：

1) 什么是细胞凋亡？

2) 什么是细胞凋亡荧光素检测系统？

3) 细胞凋亡荧光素检测系统的工作原理如何？

4) 细胞凋亡荧光素检测系统有哪些优点？

5) 细胞凋亡荧光素检测系统能分析哪些类型的细胞？

6) 细胞凋亡荧光素检测系统能和抗体细胞染色一起用吗？

7) 在实验中能诱导细胞凋亡吗？

8) 是否必须用不含甲醇的甲醛来固定细胞？

9) 从何处购买不含甲醇的甲醛？

10) 固定在玻片上的细胞在保存后能否再用？

11) 细胞凋亡荧光素检测系统能否和生物素-dUTP一起使用？

12) 应用什么滤光片检测凋亡细胞的绿色荧光？

1) 什么是细胞凋亡？ 高等真核生物的大多数细胞，在丧失生理功能或严重受损时，激活固有的细胞自杀程序而自灭。这一过程称为细胞程序化死亡。细胞凋亡这个词指细胞程序化死亡所表现的生化和形态变化，其中包括细胞收缩、膜泡化、染色质浓缩和降解成小片段。细胞凋亡中的细胞经常降解成为膜包裹的凋亡体，被巨噬细胞或邻近的细胞吞噬或消化，但不产生炎症反应。McConkey和Orrenius作了这方面的综述（1）。

2) 什么是细胞凋亡荧光素检测系统？ 细胞凋亡荧光素检测系统是一个非放射检测系统，用于在含细胞凋亡和非细胞凋亡的细胞群体中，特异地、定量地检测细胞凋亡细胞。

3) 细胞凋亡荧光素检测系统的工作原理如何？ Promega公司的细胞凋亡荧光素检测系统依据TUNEL测试方法（TdT介导的dUTP缺口和末端标记）（2）。它测量的是细胞核DNA降解成小片段，这一细胞凋亡的重要生化指标。用末端脱氧核苷转移酶（TdT）在细胞凋亡过程中，细胞形成的DNA小片段的3`-OH末端，催化加入荧光素-12-dUTP。荧光素-dUTP标记的DNA能直接用荧光显微镜观察，或用流式细胞仪定量化。

4) 细胞凋亡荧光素检测系统有哪些优点？ 简便： 细胞凋亡荧光素检测系统是一种直接测定细胞凋亡的荧光方法。不需要二抗保温。 灵敏： 在细胞凋亡的早期，可定量地在单细胞水平测定细胞凋亡。

5) 细胞凋亡荧光素检测系统能分析哪些类型的细胞？ 细胞凋亡荧光素检测系统能分析多种系统，包括培养的细胞、冰冻的细胞、福尔马林固定和蜡包埋的组织切片。

6) 细胞凋亡荧光素检测系统能和抗体细胞染色一起用吗？ 在参考文献中，介绍了测定增殖细胞核抗原，来检测DNA复制位点的方法，作为细胞增殖的指标（3）。需同时检测活或死亡的细胞时，可用细胞凋亡荧光素检测系统，检测死亡的细胞，并同时用PCNA抗体（DACO公司，CA）染色细胞，在DNA复制位点测定PCNA。

7) 在实验中能诱导细胞凋亡吗？ 能用各种方法诱导细胞凋亡。用DNA拓扑异构酶I抑制剂，喜树碱处理细胞，可在HL-60细胞中诱导细胞凋亡（4）。从生长因子依赖型细胞株中除去生长因子，可诱导细胞凋亡。在体外用素地米松处理，可在小鼠的胸腺淋巴细胞中诱导细胞凋亡。带有Fas或TNF-受体的细胞，用各自的配体激活，或用激动剂抗体作交叉反应可诱导细胞凋亡（7）。

8) 是否必须用不含甲醇的甲醛来固定细胞？ 可用不含甲醇的甲醛或顺甲醛来固定细胞。两种方法同样有效。

9) 从何处购买不含甲醇的甲醛？ 可从Polysciences公司购买不含甲醇的甲醛（10%）。Tel.:800-523-2575。

10) 固定在玻片上的细胞在保存后能否再用？ 如需要，可将有固定化细胞的玻片放在70%的乙醇中，-20oC保存2周。

11) 细胞凋亡荧光素检测系统能否和生物素-dUTP一起使用? Promega公司目前只提供荧光素凋亡检测系统。不能和生物素-dUTP一起使用。Promega公司的DeadEnd 比色法细胞凋亡检测系统(目录号#G7130)，用TdT和生物素化的核苷酸标记和测试细胞凋亡。

12) 应用什么滤光片检测细胞凋亡的细胞的绿色荧光？ 用荧光显微镜检测细胞凋亡的细胞的绿色荧光(荧光素-12-dUTP), 经碘化丙锭染色非细胞凋亡的细胞, 呈现红色背景。用普通的荧光素激活和发射滤光片520+/-nm观察细胞凋亡的细胞。在>620 nm时观察碘化丙锭的红色荧光。 REFERENCES: 1. McConkey, F J And Orrenius S (!994) Trends Cell Biol 2, 370. 2. Bavrieli, Y et al (1992) J Cell Biol 119, 493. 3. Li, X et al (1996) Experimental Cell Research 222, 28. 4. Del Bino , G et al (1991) Exp Cell Res 195, 485. 5. Batistatou ,A and Greene, L (1991) J Cell Biol 115, 461. 6. Cohen, J J and Duke R D (1984) J Immunol 132,38. 7. Tewari, M and Dixit, V M (1995) J Biol Chem 270,3255.

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