CellTiter 96, CellTiter 96AQueous,CellTiter 96AQueous
单溶液非同位素细胞增值测试法
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一些常见问题： |
| 1) 什么是CellTiter 96,CellTiter 96AQueous,CellTiter 96AQueous单溶液非同位素细胞增值测试法？ |
| 2) CellTiter 96, CellTiter 96AQueous, CellTiter 96AQueous单溶液非同位素细胞增值测试法的工作原理如何？ |
| 3) CellTiter 96和CellTiter 96A Qu eous有什么差异？ |
| 4) CellTiter 96AQueous和CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法有什么差异？ |
| 5) CellTiter 96, CellTiter 96AQueous, CellTiter 96AQueous单溶液非同位素细胞增值测试法所得产物的测试波长是多少？是否用参照波长？ |
| 6) CellTiter 96, CellTiter 96AQueous, CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法和3H-胸腺嘧啶掺入法相比如何？ |
| 7) CellTiter 96, CellTiter 96AQueous,CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法和3H-胸腺嘧啶掺入法相比有何优点 ？ |
| 8) 能用CellTiter 96, CellTiter 96AQueous,CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法测试哪些细胞？是否有些细胞类型需作特殊考虑 ？ |
| 9) 一般的背景吸收值是多少？影响背景的因数有哪些？如何修正结果的背景值？ |
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1) 什么是CellTiter 96, CellTiter 96AQueous,CellTiter 96AQueous单溶液非同位素细胞增值测试法？
CellTiter 96, CellTiter 96AQueous,CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法是除3H-胸腺嘧啶掺入法以外，可用于增值实验中测定活细胞的方法，快速、简便、非放射。除用于细胞增值实验外，还可用于细胞附着[Klemke, R L et al (1994) J Cell Biol 127 859],细胞毒理[Capping, B G et al (1988) Leukemia Res 12, 823]和细胞凋亡[Wong G H W, and Goeddel D V (1994) J Immunol 152, 1751]。 |
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2) CellTiter 96, CellTiter 96AQueous,CellTiter 96AQueous单溶液非同位素细胞增值测试法的工作原理如何？
测试法的工作原理是在细胞内将四唑盐转化为甲月替产物（MTT-CellTiter 96或者MTS-CellTiter 96AQueous，CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法）。甲月替产物有特定的吸收波长，可在普通的ELISA平板读数仪上计数。在多数系统内，吸收值和培养的活细胞数目成正比。 |
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3) CellTiter 96和CellTiter 96AQueous有什么差异？
CellTiter 96和CellTiter 96AQueous的测试原理，是活细胞将四唑盐转化为甲月替产物。主要差别是CellTiter 96AQueous（以及CellTiter96AQueous单溶液测试）用MTS而不是用MTT作为四唑盐试剂，测试中，MTS被转化为可溶的甲月替产物，而不需象用MTT的CellTiter 96系统一样需用有机液化溶液。因此，CellTiter 96AQueous和CellTiter96AQueous单溶液测试在读数后，如需要时还可放进培养箱，作进一步的显色反应和时间过程测试。 |
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4) CellTiter 96AQueous和CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法有什么差异？
CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法将四唑盐（MTS）和电子偶和试剂（PES）混合成单一的，稳定的溶液。而CellTiter 96AQueous中MTS和PMS（不同的电子偶和试剂）不混合。方便的单溶液CellTiter96AQueous细胞增值测试法优于CellTiter 96AQueous法。 |
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5) CellTiter 96, CellTiter 96AQueous, CellTiter 96AQueous单溶液非同位素细胞增值测试法所得产物的测试波长是多少？是否用参照波长？
用CellTiter 96细胞增值测试法将MTT还原为甲月替产物，吸收峰值为570nm, 可用作读数的波长范围是550-600nm。用CellTiter 96AQueous,CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法将MTS还原为甲月替产物，吸收峰值为490nm，可用作读数的波长范围是450-540nm。用参照波长可减少细胞碎片，指纹和非特异吸收造成的背景值。可用的波长范围是630-750nm，用650nm以上的波长可增强灵敏度。如果所用的读数仪无双波长，不用参照波长，只对重复测试样品的准确度带来微小的影响。 |
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6) CellTiter 96, CellTiter 96AQueous,CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法和3H-胸腺嘧啶掺入法相比如何？
用CellTiter 96, CellTiter 96AQueous, CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法不需进行细胞收集或换培养液，标准偏差较3H-胸腺嘧啶掺入法小，后者需对细胞作更多的处理，因此增加出错率。用3H-胸腺嘧啶掺入法和颜色转化法作直接比较，测定几个样品的生长因子的含量，两种方法所得数据相差小于5%（图1）[Riss T(1991)Promega Notes 32, 1 Buttke, TM et al (1993) J Immunl Methods 157, 233]。如用3H-胸腺嘧啶掺入法，可在需加颜色溶液时加入同位素胸腺嘧啶。 |
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7) CellTiter 96, CellTiter 96AQueous,CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法和3H-胸腺嘧啶掺入法相比有何优点？
有以下优点：
非同位素测定
少量的手工操作
快速
不须收集和洗细胞
96孔板可用ELISA平板读数仪读数
附着或悬浮的细胞可用同样的步骤测试 |
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8) 能用CellTiter 96, CellTiter 96AQueous, CellTiter 96AQueous单溶液细胞增值测试法测试哪些细胞？是否有些细胞类型需作特殊考虑？
大多数培养的真核细胞，包括哺乳类（附着或悬浮的细胞类型），植物和酵母细胞可使颜料有效还原。有些细胞的代谢低（如血液淋巴细胞），需更多的细胞数（每个孔需5-25倍的细胞数）才能获得有效读数。系统还可用于细菌[Stevens, MG and Olsen S C (1993) J Immunol Methods 157, 225], 真菌 [Mikami Y et al (1994)Mycoses 37, 27 ]，以及原虫 [Dungan, CF and Hamilton RM (1995) J Euk Microbiol 42, 379] |
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9) 一般的背景吸收值是多少？影响背景的因数有哪些？如何修正结果的背景值？
无细胞时也有背景，这属正常。所用细胞培养液、血清类型、pH值的增高、培养液中存在还原剂会造成背景吸收。经4小时培养后，背景值是0.2-0.4单位，可用对照孔测试。准备3套细胞孔（无细胞），和实验用孔含等体积的培养液和试剂。将平均读数减去无细胞对照孔读数，得到正确吸收值。 |
