| 描述: 类胰蛋白酶是肥大细胞颗粒的主要蛋白质,也是切开精氨酸和赖氨酸残基的主要蛋白质。类胰蛋白酶储存在肥大细胞颗粒中,一旦被激活,就从其中释放出来。许多组织中都有肥大细胞,但沿身体的上皮层中,如皮肤,呼吸道和胃肠道,以及围绕在血管的血管周围组织中数量最多。它们牵涉到许多生理和病理状态,包括速发型超敏反应,迟发型超敏反应,细胞生长调节,对抗肿瘤形成,疼痛和痒感觉。也牵涉到慢性炎症状态和神经免疫相互作用。最近出品的重组人类胰蛋白酶将帮助研究人员更全面了解类胰蛋白酶、肥大细胞的生物作用,鉴别类胰蛋白酶胞内靶标(1)。
皮肤βI类胰蛋白酶人重组型(rhSkinβTryptase)和肺βII类胰蛋白酶人重组型(rhLungβTryptase)是中性丝氨酸蛋白酶。人β类胰蛋白酶已被克隆,并在Pichia
pastoris 中稳定表达成具有完全活性的四聚体酶,经亲和离子层析纯化(2)。两个酶在缓冲液组分、酶浓度和糖基化方式方面都不同。我们提供的rhLung
类胰蛋白酶以较高浓度(2mg/ml)溶于基础缓冲液 (不含肝素),便于层析研究。通过糖苷酶消化和Western分析重组和天然肺类胰蛋白酶发现,rhLung类胰蛋白酶的糖基化更接近于尸体酶。
特点
● 高特异活性:
特异活性稳定,总是天然肺类胰蛋白酶的130-150%。
● 稳定性:因为是重组蛋白的表达,所以批与批之间极为统一。
● 安全:不存在与天然尸体类胰蛋白酶相关的人类病原体。
● 纯:与天然类胰蛋白酶比,皮肤β和肺β类胰蛋白酶没有其它蛋白酶污染,每毫克蛋白质有更多的活性,没有多余的蛋白质干扰。
储存条件:存于-20℃,产品自购买之日起稳定6个月。
性质
● 特异活性:以0.4mM
Nα CBZ-L-赖氨酸硫代苄酯为底物测量水解速率,试剂是Ellman试剂(5,5’-二硫代-双(5-硝基苯甲酸),终体积1ml,25℃孵育1分钟,在410nm监测吸收值变化。一个单位定义为每分钟一个吸收单位的变化。
rhSkin 类胰蛋白酶>1,000单位/mg 蛋白质。
rhLung 类胰蛋白酶>1,200单位/mg 蛋白质。
● 浓度:rhSkin β类胰蛋白酶:200μg/ml
于10mM MES,10%甘油, 200 mM NaCl
和0.5mg/ml 肝素(pH6.1)。rhLungβ类胰蛋白酶:2
mg/ml于10mM MES(pH6.1),含2M NaCl。
参考文献
1. Harris, J. et al.
(2001)J. Biol. Chem. 276,34941-7。
2. Niles,A.L. et al. (1998)Biotechnol.
Appl. Biochem. 28,1
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