描述：GeneClip™ U1 发卡克隆系统含有线性化质粒，主要用于方便快捷地克隆人的目标序列，在人类细胞中表达短发卡RNA(shRNAs)。

系统优势
● 更多的载体选择：GeneClip™ 系统提供多种带有抗性标记或hMGFP基因的真核细胞载体，可进行细胞的稳定转染。hMGFP用于测定转染效率及使用FACS^®分析的方法筛选转染细胞。
● 节省时间：载体被预先消化，省去了费时的载体准备过程，可以提供高效的发卡连接反应。
● 方便快捷：除含有pGeneClip™ 载体外，每个系统还都含有T4 DNA连接酶，2X快速连接缓冲液和寡核苷酸退火缓冲液。
● 容易筛选预期克隆：通过Pst I单一酶切可以很快筛选阳性重组子。

操作手册：TM256

描述：siLentGene™-2 U6 发夹克隆系统 （人）的基础是从U6启动子表达一些回折环状结构（shRNA）的siRNA。在这里,通过一步PCR扩增出含有一个U6启动子、一个发夹（shRNA）靶标序列和一个转录终止序列的DNA盒。这个PCR产物既可以直接转染进人类细胞，快速筛选最佳靶标序列，也可以克隆进我们提供的去磷酸化的psiLentGene™-Basic载体进行靶标基因的瞬时抑制实验。这套系统还为长期稳定的RNAi分析提供有不同抗生素选择标记（嘌呤霉素，潮霉素，新霉素）的载体。

我们的siRNA靶标设计软件（www.promega.com/siRNADesigner/)为Promega的系统设计可用于生产siRNA的寡聚核苷酸。这个软件分析输入的DNA或RNA序列，寻找符合设计siRNA要求的区域。软件为所选择系统建议的最佳靶标区域将与产生这些靶标区域所需要的寡聚核苷酸一起陈列，而完整输入序列的siRNA区域会被加粗。

特点

●更多的载体选择：这些系统提供的载体含有一系列真核抗生素选择标记。
●省时：已消化好的线形载体省去了费时的载体制备过程。一步法PCR可产生shRNA-表达结构。
●方便：系统除含有psiLentGene™载体外，还包含高保真PCR混合母液、U6盒DNA、上游引物、T4 DNA连接酶和2X快速连接缓冲液。
●容易鉴别所要克隆：使用蓝/白斑筛选加EcoR V 消化快速鉴别含有全长插入片段的阳性重组子。

应用

●人类细胞中DNA指导的RNA干扰。

载体图和序列

psiLentGene™ 基本 图和载体序列

psiLentGene™ 嘌呤霉素载体图和序列

psiLentGene™ 潮霉素载体图和序列

psiLentGene™ 新霉素载体图和序列

储存条件：存于-20oC。

操作过程概揽

每个系统包含的试剂足够20次反应

描述：siSTRIKE™ U6 发夹克隆系统是一系列线形质粒，可以容易、快速地用于克隆发夹靶标序列，在人类细胞中表达siRNA靶标序列。这里合成的是两个短的DNA寡聚核苷酸，退火后形成DNA片段，这个插入片段含有发夹siRNA靶标序列。退火之后，寡聚核苷酸形成的末端与线状siSTRIKE™ 载体末端相容，可以促进粘末端连接。这个质粒含有人类U6启动子，可以被RNA聚合酶III识别。一旦被转染，RNA聚合酶III就在细胞内转录发夹靶标序列生成siRNA。然后，这个RNA发夹结构与RISC相互作用导致RNA干扰。大多数载体还含有一个抗生素标记以筛选被转染的细胞，这样可减小依赖于转染效率而产生的效果。

特点
● 更多的载体选择：这个系统提供的载体，含有一系列真核的抗生素选择性标记。
● 省时：载体已事先经过切割，避免了费时的载体制备过程。
● 方便：系统含有T4 DNA连接酶，2x快速连接缓冲液，寡聚核苷酸，退火缓冲液，还有psiSTRIKE™ 载体。
● 易于检测到所需克隆：用Pst I消化就可快速鉴别阳性重组子。
● 在人类细胞中进行的DNA指导的RNA干扰。

操作手册

储存条件：存于-20℃。

图片siSTRIKE™ U6发夹克隆系统-Basic (C7890)

特点

● 省钱：一般萤光发光计就可定量，不需购买昂贵的仪器。

● 方案可选：既可测量活细胞，也可测量粗细胞裂解液。

● 省时：不需耗时耗力的检测，不需等待表型变化。

● 少一步转化：使用psiCHECKTM-2 时不需要为转化设内对照。

操作手册

载体序列 psiCHECK™-1 载体序列

　　　　　psiCHECK™-2 载体序列

过程概揽 psiCHECK™ 载体作用机理

P1700的组分
1x100μl 混合酶，T7表达
1x200μl RNase A 溶液
1x5μg pGEM® 阳性表达对照模板
1x110μ RQ1 无RNA酶的DNA酶
1x500μl RiboMAX™ 表达 T7 2x缓冲液
1x1.25ml 无核酸酶的水
1x1ml 醋酸钠，3.0M（pH5.2）

T7 RiboMAX™ 表达RNAi系统可用来合成哺乳动物系统中的21bp的短干扰RNA(siRNA)。也可以合成发夹siRNA。在体外合成的这些siRNA已被证明与化学合成的siRNA在哺乳动物细胞中诱导的RNAi效果相同。在使用这个系统的过程中，两条互补的RNA链被从使用者准备的DNA模板为模板合成出来。生成的RNA链在转录反应完成后退火形成siRNA。然后将siRNA二聚体纯化，导入合适的哺乳动物细胞系内。

特点
● 省时：在30分钟内，T7 RiboMAX™ 表达RNAi系统制造出毫克级数量的RNA。
● 减少吸取错误：四种rNTP和2x转录缓冲液已被混合好，这样既减少了吸取错误的机会，也减少了实验时间。

应用
● 合成用于哺乳动物RNA干扰的siRNA二聚体或发夹siRNA。
● 为非哺乳动物RNA干扰制造大量长的dsRNA。

操作手册

描述：CodeBreaker™ siRNA转染试剂是专利配方，为有效转染短干扰RNA（siRNA）而优化设计。该试剂有效促进siRNA转染进哺乳动物细胞，比起其它RNAi转染试剂来，经这种试剂转染的细胞能有效地进行基因沉默，而死亡水平最低。使用该产品时无须溶解，直接将CodeBreaker™转染试剂与合适的siRNA二聚物混合，孵育几分钟，将混合物直接加到培养细胞中。转染可在完全生长培养基中进行，不需要更换培养基或再加血清。
特点
● 即可使用：不需溶解。
● 低毒：可获得最大数量的细胞进行分析。
● 有效：在常规细胞系中，一般观察到80%以上的干扰结果。
● 灵活：在无血清培养基中有很好的功能。
应用
向不同的真核细胞系中转染干扰RNA（siRNA）。

操作手册

储存条件：存于4°C。