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前言

有两种体外翻译的基本方法：以RNA为模板，或以DNA为模板（即偶联的转录/翻译）。RNA模板可以是总RNA、mRNA或体外合成的转录子。DNA模板可以是一个质粒，或一个PCR/RT-PCR产物，这个PCR/RT-PCR产物在转录启动子和翻译起点下游含有需要翻译的基因。选择哪一个体外翻译系统取决于许多因素，这些因素包括要翻译的基因的来源（真核/原核），可提供的模板（如RNA或DNA），和所生产的蛋白质的下游应用。

翻译系统的选择
虽然不是必须，但一般说，选用真核系统来翻译真核序列，选用原核系统来翻译原核序列。如果一个系统存在功能上或抗原的交叉反应，就得选择另一个系统。使用微粒体膜进行翻译后修饰或加工一般只与兔网织红细胞系统兼容。仅在某些特定条件下麦胚芽翻译系统才与微粒体膜兼容。

由应用决定翻译系统的选择

应用	TNT^®兔网织红细胞	TNT^®麦胚芽	兔网织红细胞裂解物	麦胚芽	S30环状	S30线状	T7 S30环状	TNT^® 快速	TNT^®PCR
用质粒DNA作模板翻译	+++	++	-	-	++	++	++	+++	+
用PCR片段翻译	++	++	-	-	-	++	-	++	+++
从RNA模板翻译	+	+	+++	+++	-	+	-	+	+
确认克隆基因	+++	+++	++	++	++	++	++	+++	+
蛋白蛋白相互作用	+++	+++	++	++	++	++	++	+++	+++
蛋白DNA相互作用	+++	+++	++	++	++	++	++	+++	+++
蛋白截短实验	++	++	+	+	-	-	-	++	+++
突变分析	+++	+++	++	++	++	++	++	+++	+++
药物筛选/高通量筛选（翻译抑制）	++	++	+++	++	+++	++	++	+++	+++

符号：（+++）推荐；（++）满意；（+）有可能；（-）不推荐

蛋白质体外翻译系统小结和比较

翻译系统	环状DNA	线状DNA	RNA	启动子	用犬微粒体膜作信号肽切割和糖基化	核糖体结合位点	蛋白质产量(50ul 反应)
真核
TNT^®兔网织红细胞裂解液	是	是⁷	是	T7，T3，SP63和组合	是	不	~150-300ng⁴
TNT^®麦胚芽提取物	是⁶	是⁷	是	T7，T3，SP63和组合	不²	不	~150-300ng⁴
兔网织红细胞裂解液	不	不	是	不	是	不	~150-200ng⁴
胚芽提取物	不	不	是	不	不	不	~30-150ng⁴
原核
E.coli S30环状	是	不	不	强E.coli5	不¹	是	~120-250ng⁴
E.coli S30线状	是	是	是	强E.coli（仅DNA）⁵	不¹	是	~120-250ng但对RNA模板效果差⁴
E.coli T7 S30环状	是	不	不	T7或强E.coli	不¹	是	~300ng⁴

1．观察到有些细菌对β-内酰胺酶基因有加工。
2．蛋白质要与小泡联系发生加工，必须有信号识别颗粒（SRP）与蛋白质作用。我们在制备麦胚芽提
取物时，在EDTA步骤中去掉了SRP。若要优化麦胚芽加工，或加入外源SRP，或制备膜时应去掉EDTA剥离
步骤。
3．这些系统中启动子的选择对翻译影响很大。
4．使用系统中包括的正对照。若要讨论可能影响您蛋白质翻译的参数，请联系技术服务部门。
5．只能使用超螺旋不敏感E.coli 启动子。
6．含有T7 RNA 启动子的质粒应线化。
7．仅T7 线状DNA模板效果好。
　

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